猪旋毛虫病诊断技术
发布日期：2008-12-1515:54:35来源：甘肃省动物疫病预防控制中心作者：
猪旋毛虫病诊断技术中华人民共和国国家标准猪旋毛虫病诊断技术GB／T186422002Diagnostictechniquesfortrichinellaspiralisinswine1、范围本标准规定了旋毛虫压片镜检、集样消化等诊断技术。本标准适用于产地检疫、屠宰加工、流行病学调查和进出口猪及猪肉的检疫。2、压片镜检法 2.1 实验材料 2.1.1甘油透明液、盐酸溶液、美蓝溶液[见附录A（标准的附录）]。 2.1.2仪器：显微镜。 2.2 操作方法 2.2.1新鲜肉检验 2.2.1.1采样 自胴体两侧的横膈膜肌脚部各采样一块，记为一份肉样，其质量不少于50g～100g，与胴体编成相同号码。如果是部分胴体，可从肋间肌、腰肌、咬肌、舌肌等处采样。 2.2.1.2目检 撕去膈肌的肌膜，将膈肌肉缠在检验者左手食指第二指节上，使肌纤维垂直于手指伸展方向，再将左手握成半握拳式，借助于拇指的第一节和中指的第二节将肉块固定在食指上面，随即使左手掌心转向检验者，右手拇指拨动肌纤维，在充足的光线下，仔细视检肉样的表面有无针尖大半透明乳白色或灰白色隆起的小点。检完一面后再将膈肌翻转，用同样方法检验膈肌的另一面。凡发现上述小点可怀疑为虫体。 2.2.1.3压片 可按下述方法制备压片： a）放置夹压玻片：将旋毛虫夹压玻片放在检验台的边沿，靠近检验者； b）剪取小肉样：用剪刀顺肌纤维方向，按随机采样的要求，自肉上剪取燕麦粒大小的肉样24粒，使肉粒均匀地在玻片上排成一排（或用载玻片，每片12粒）； c）压片：将另一夹压片重迭在放有肉粒的夹压片上，并旋动螺丝。使肉粒压成薄片。 2.2.1.4镜捡 将制好的压片放在低倍显微镜下，从压片一端的边沿开始观察，直到另一端为止。 2.2.1.5判定标准 镜检判定标准如下： a）没有形成包囊期的旋毛虫：在肌纤维之间呈直杆状或逐渐蜷曲状态，或虫体被挤于压出的肌浆中。 b）包囊形成期的旋毛虫：在淡蔷薇色背景上，可看到发光透明的圆形或椭圆形物，囊中央是蜷曲的虫体。成熟的包囊位于相邻肌细胞所形成的梭形肌腔内。 c）钙化的旋毛虫：在包囊内可见数量不等、浓淡不均的黑色钙化物，或可见到模糊不清的虫体，此时启开压玻片，向肉片稍加10％的盐酸溶液，待1rain～2rain后，再行观察。 d）机化的旋毛虫：此时压玻片启开平放桌上，滴加数滴甘油透明剂于肉片上，待肉片变得透明时，再覆盖夹压玻片，置低倍镜下观察，虫体被肉芽组织包围、变大，形成纺锤形、椭圆形或圆形的肉芽肿。被包围的虫体结构完整或破碎，乃至完全消失。 2.2.2冻肉的检验 2.2.2.1冻肉的检验同2.2.1。 2.2.2.2冻肉的染色方法如下： a）压片:同2.2.1.3. b）染色：在肉片上滴加1-2滴美蓝或盐酸水溶液,浸渍1min,盖上夹压玻片。 c）镜检：美蓝染色法：肌纤维呈淡青色，脂肪组织不着染或周围具淡。旋毛虫包囊呈淡紫色、蔷薇色或蓝色。虫体完全不着染。盐酸透明法：肌纤维呈淡灰色且透明，包囊膨大具有明显轮廓，虫体清楚。3、集样消化法 3.1实验材料 3.1.1消化液：配制方法见附录B（标准的附录）。 3.1.2器械：80目铜网（网眼直径为±0.18mm）、漏斗、分液漏斗、凹面皿、组织捣碎机、温度计、加热磁力搅拌器、显微镜（或倒置显微镜）。 3.2操作方法 3.2.1采样 3.2.1.1部位：采集胴体横膈肌脚和舌肌。 3.2.1.2方法：去除脂肪、肌膜或腱膜。 3.2.1.3数量：每头猪取1个肉样（100g），再从每个肉样上剪取1g小样，集中100个小样（个别旋毛虫病高发地区以15～20个小样为一组）进行检验。 3.2.2绞碎肉样 将100个肉样（重100g）放入组织捣碎机内以2000r/min，捣碎时间30s～60s，以无肉眼可见细碎肉块为度。 3.2.3加温搅拌 将已绞碎的肉样放入置有消化液的烧杯中，肉样与消化液（见附录B）的比例为1：20,置烧杯于加热磁力搅拌器上，启动开关，消化液逐渐搅成一漩涡，液温控制在40℃～43℃之间，加温搅拌30min～60min，以无肉眼可见沉淀物为度。 3.2.4过滤 取80目的筛子，置于漏斗上。漏斗下再接一分液漏斗，将加温后的消化液徐徐倒入篮子。滤液滤入分液漏斗中，待滤干后，弃去筛子上的残渣。 3.2.5沉淀 滤液在分液漏斗内沉淀10min～20min，旋毛虫逐渐沉到底层，此时轻轻分几次放出底层沉淀物于凹面皿中。 3.2.6漂洗 沿凹面皿边缘，用带乳头的10mL吸管徐徐加入37℃温自来水，然后沉淀1min～2min，并轻轻沿凹面皿边缘再再轻轻多次吸出其中的液体如此反复多次，加入或吸出凹面皿中的液体均以不冲起其沉淀物为度，直至沉淀于凹面皿中心的沉淀物上清透明（或用量筒自然沉淀，反复吸取上清的方法进行漂洗）。 3.2.7镜检 将带有沉淀物的凹面皿放入倒置显微镜或在80~100倍的普通显微镜下调节好光源，将凹面皿左右或来回晃动，镜下捕捉虫体、包囊等，发现虫体时再对这一样品采用分组消化法进一步复检（或压片镜检），直到确定病猪为止。附录A（标准的附录）旋毛虫压片法用溶液配制A1甘油透明液甘油 20mI.加双蒸水至 100mI.A2盐酸水溶液盐酸（HCl） 20mI加双蒸水至 100mLA3美蓝溶液饱和美蓝酒精溶液 5mI加双蒸水至 100mL附录B（标准的附录）消化液的配制胃蛋白酶（3000国际单位） 10g盐酸（密度1.19） 10mI加蒸馏水至 1000mL加温40C搅拌溶解，现用现配。
