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正文摘录:
・234・四川医学2006年3月第27卷（第3期）SichuanMedicalJournal，2005，V01.27，No.3视网膜母细胞瘤组织芯片中Bag.1的表达及其意义王国平’，惠延年（解放军第四军医大学西京医院，全军眼科研究所，陕西西安710032）【摘要】目的检测Bag―l在视网膜母细胞瘤中和正常组织中的表达，并讨论其意义。方法利用组织芯片采用免疫组化s―A法检测视网膜母细胞瘤和正常组织中Bag-1的表达。结果视网膜母细胞瘤组织芯片中Bag―l在胞核，胞浆均有高表达，在正常组织中表达阳性率低。两者间存在显著性差异（P＜0.05）。结论Bag―l的高表达提示其可能参与了视网膜母细胞瘤的发生。【关键词】免疫组织化学；视网膜母细胞瘤；组织芯片；Bag一1【中图分类号】R739.7【文献标识码】A【文章编号】1004。0501（2006）03―0234―02ExpressionandsignificanceofBag-1inretinoblastomabytissuemicroarray.WangGuoping.HuiYannian.P以EyeInstitute，xijingHo~itd。theFourthMilitaryMedwalUniversity。Xi'an，Shanxi710032・China【Abstract】ObjectiveTodetectBag一1expressioninretinoblastomaandnormaltissuewithtissuemieroarrayandtodiscussit'sclinicalsignificance.MethodsTheexperimentwasdoneintheLaboratoryoftheFourthMilitaryMedicalUniversityofChinesePLAbe―tweenJuneandAugust2005.TissuemicroarrayofretinoblastomaandnormalretinatissueswereusedtodeterminetheexpressionofBag―S-Asystem.ResultsBag―1wasdetectedstrongexpressioninthenucleusandcytoplasmintheca_ricertis―sue，whileitwashardlyseeninthenormalretinalcells.Thereweresign~eantdifferenceofpositiveratesofBag一1expressionbetweenthecancertissueandthenormaltissues（P＜0.05）.ConclusionThereisanoverexpressionofBag一1inretinoblastoma。suggestingthatBag一1mayberelatedtoretinoblastoma.【Keywords】immunohistochemistry；retinoblastoma；tissuemicroarray；Bag-1视网膜母细胞瘤是儿童最常见的原发性眼内恶性肿瘤，患病率约为1：（14000～20000），其发病机制多认为由抑癌基因RB缺失或失活所致。近年来更多的研究集中于抗凋亡因子对其的作用。Bag.1是新发现的多功能抗凋亡基因，检测Bag.1在视网膜母细胞瘤中的表达情况，对进一步研究视网膜母细胞瘤的发生，发展机制有着十分重要的意义。但国内外尚无相关的文献报道。我们应用免疫组化染色方法在组织芯片中检测了视网膜母细胞瘤和正常视网膜组织中Bag.1的表达情况，并就其意义进行了初步讨论。1材料和方法1.1材料：组织芯片购自Cybrdi公司，共22块组织，其中视网膜母细胞瘤16例，正常对照5例，已知阳性对照1例。芯片直径2mm，厚度5弘m。试剂：兔抗人Bag.1抗体购自武汉博士德公司，抗Bag.1的工作浓度1／50。1.2实验方法：Bag.1的检测采用免疫组化S.A法。主要步骤如下：①60c【=烤片30min；常规脱蜡水化以0.01McB（pH6.0）高温高压修复抗原，冷却至室温；PBS洗5min×2次；3％H202.甲醇封闭内源性过氧化物酶，室温10min；PBS5min×2次；②滴加正常兔血清封*武警四川总队医院，四川1乐山614000闭液，室温15min；甩去多余液体滴加一抗，4~C过夜；③0.I％Tween.PBS洗5min×3次；滴加生物素标记羊抗鼠／抗兔二抗工作液，37℃孵育13min；0.1％Tween。PBS洗5minx2次；滴加HRP标记的链霉卵白素工作液，37℃孵育13min；0.1％Tween―PBS洗5min×3次；④DAB显色，自来水冲洗终止显色；苏木精复染、水洗、分化后充分水洗返蓝；常规脱水透明，中性树胶封片；⑤阴性对照为PBS替代一抗和正常兔血清替代一抗的空白对照，已知Bag一1表达阳性的乳腺癌标本作阳性对照。1.3评估标准：每例切片在20个高倍视野下进行细胞计数，每个视野计数50个细胞，共1000个细胞，计算着色细胞所占比例。无着色细胞、背景同阴性对照或者阳性细胞比例不超过5％者为阴性（一）；阳性细胞呈淡棕黄色和／或阳性细胞率＜50％为弱阳性（+）；阳性细胞呈深棕黄色和／或阳性细胞率＞50％为强阳性（++）。1.4统计学分析：统计阳性标本例数，计算阳性表达率。在对实验组肿瘤组织及对照组正常视网膜组织中的Bag一1阳性染色结果进行比较，用四格表资料的Fisher确切概率法检验，检验水准为：a=0.05。判断不同视网膜母细胞瘤分型中Bag.1的表达情况用Wilcoxon秩和检验，检验水准为：ot=0.05。
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