【摘要】目的探讨原癌基因c-myc、c-fos与良性胆道狭窄形成的相关性。进一步阐明良性胆道狭窄中胆管瘢痕的发生机制。方法应用免疫组化SP法，检测c-myc、c-fos蛋白在肝内、外胆管瘢痕组织中的表达和分布。对其阳性表达结果进行比较分析。结果肝内、外胆管瘢痕组织的成纤维细胞、胆管上皮细胞及血管内皮细胞中c-myc、c-fos呈强阳性表达，而正常胆管组织中缺乏表达。结论肝内、外胆管瘢痕组织中c-myc和c-fos癌基因受激活，可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控，并导致瘢痕增生。原癌基因c-myc、c-fos与良性胆道狭窄瘢痕形成密切相关。c-myc与c-fos蛋白两者的表达成正相关，两者具有协同性。转载于论文联盟http://www.lwlm.net
【关键词】原癌基因c-myc原癌基因c-fos良性胆管狭窄胆管瘢痕
Expressionofc-myc、c-fosinscartissueofbenignbiliarystrictureandcorrelationinvestigation
LUHui，ZHANGXiao-wen,LIUWen-yong.DepartmentofSurgery,FengchengHospital,Shanghai201411,China
【Abstract】ObjectiveToobservetheexpressionanddistributionofc-mycandc-fosinbiliaryscartissue,toinvestigatethecorrelationbetweenexpressionofkeypro-oncogenesandbenignbiliarystricture.MethodsImmunohistochemicaltechniquewasusedtodetecttheexpressionanddistributionofc-myc、c-fosproteinsonextrahepaticbileductscartissue、intrahepaticbileductscartissueandnormalbileducttissue.Resultsc-mycandc-fosexpressiononthenucleusoffibroblast、epithelialcellandendothelialcellofbiliaryscartissuesweresignificantlyhigherthannormalbiliarytissue.Andtherewasobviouslydifferencebetweenscartissueandnormaltissue.Conclusionc-mycandc-fosoncogenesareactivatedonbiliaryscartissues,whichmaycontributetoproliferationanddifferentiationoffibroblasts、synthesisanddegradationofcollagenandregulationofcytokinesandinduceabnormalscarring.Therewasclosecorralationbetweenc-myc、c-fosproto-oncogenesandbenignbiliarystricturescartissue.therewerepositivecorrelationsandco-operativitybetweenc-mycandc-fosexpression.
【Keywords】proto-oncogenesc-myc；proto-oncogenesc-fos；benignbiliarystricture；bileductscar
胆道狭窄一直是胆道外科领域中病变复杂处理困难的课题。近来一些研究表明，部分原癌基因在组织再生等过程中常被激活，可能通过调控某些细胞因子来控制病理性瘢痕增生。但对于在胆道瘢痕的形成过程中,原癌基因是否参与调控及表达尚不清楚。本研究探讨了肝内、外胆管瘢痕组织中c-myc和c-fos蛋白的表达及c-myc、c-fos的表达与胆管瘢痕形成的相关性。试从分子水平来了解良性胆道狭窄形成机制，为临床防治胆管瘢痕提供理论依据。
1材料与方法
1.1标本来源收集昆明医学院第二附属医院2000年1月～2005年6月，手术治疗经病理科证实的肝外狭窄胆管瘢痕标本20例，其中男12例，女8例。肝内狭窄胆管瘢痕标本12例。正常胆管组织取自肝移植供体的肝外胆管6例，意外死亡的健康成人肝外胆管4例,共10例。
1.2c-myc和c-fos蛋白表达的检测免疫组化采用SP法。标本全部用10%甲醛溶液固定,石蜡包埋后连续切片，片厚5μｍ。切片经二甲苯脱蜡、H2O2室温灭活内源性酶、修复抗原、正常血清封闭、滴加一抗、4℃过夜、DAB显色、苏木素衬染、脱水、透明、封片等处理。工作浓度：c-myc1：50、c-fos1：50。鼠抗人c-myc单克隆抗体、鼠抗人c-fos单克隆抗体及免疫组化法染色试剂购自福州迈新生物技术公司产品。以已知阳性切片作为阳性对照，以PBS液（pH7.4）代替一抗作为每一次染色的阴性对照。
1.3结果判断参照1996年全国免疫组织化学技术与诊断标准化专题研讨会意见：细胞质或核内见淡黄色颗粒明显高于背景色为阳性细胞。阳性细胞评定标准:c-myc、c-fos主要以细胞核染成棕黄色为阳性细胞。细胞的着色强度可分为以下级数:“-”为阴性细胞;“+”为细胞核和（或）细胞质染成淡棕黄色;“+++”为深棕黄色;“++”则介于两者之间。每例标本随机取5个高倍（100倍）视野观察和计数阳性细胞,计算出平均值。
1.4统计学处理数据用均数±标准差（x±s）表示，采用非参数检验中Kruskal-WallisTest和Man-WhitneyTest进行多组间的比较。α=0.05,P<0.05表示两组差异有显著性。采用Spearman相关分析进行c-myc和c-fos表达关系的分析。统计学处理应用SPSS10.0软件系统,计算机处理。
2.1形态学观察正常胆管组织c-myc蛋白无表达或极少量表达,淡染。在肝内、外胆管瘢痕组织中表达呈强阳性,阳性细胞呈棕黄色，主要定位于细胞核，细胞质中少量弱阳性表达，在胆管上皮细胞、血管内皮细胞、增生的成纤维细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞中均有强阳性表达（见图1、2），两者的分布较一致，阴性对照片不着色。c-fos蛋白阳性分布与c-myc蛋白较一致（见图3、4）。
2.2组织切片c-myc、c-fos蛋白定量分析每张组织切片在高倍镜下（×100）随机选择5个视野，计数c-myc、c-fos蛋白表达的阳性细胞数，计算出平均值。数据经统计分析，发现两指标中，肝内、外胆管瘢痕组织表达均较高，正常胆管组织表达最弱。经两两比较，肝内、外胆管瘢痕组间差异无显著性（P>0.05），而两组与正常胆管对照组比较差异均有非常显著性（P<0.01）,见表1。表1各组中c-myc、c-fos蛋白定量分析结果注：与正常胆管对照组比较，*P<0.01
