非霍奇金淋巴瘤中MMP

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【关键词】明胶酶B；白细胞介素6；淋巴瘤,非霍奇金；免疫组织化学

　　ExpressionsofMMP9andIL6innonHodgkinslymphomaandtheirRelationshipswithprognosis

　　【Aastract】AIM:Tostudytheexpressionofmatrixmetalloproteinase9（MMP9）andinterleukin6（IL6）innonHodgkinslymphomaanditssubtypes,andevaluatetherelationshipbetweenthestaininggradesofthesemarkersandtheprognosis.METHODS:ImmunohistochemicalSPmethodwasusedtodetecttheexpressionsofMMP9andIL6inthetissuesofnonHodgkinslymphoma（n=51）.Thesepatientsgetafollwupof7years.RESULTS:TheexpressionsofMMP9andIL6weremainlyfoundincytoplasmofthetumorcellsbyimmunohistochemicalSPmethod,andtheirexpressionsintumorcellswerehigherthanthoseinreactivehyperplasiaoflymphnodes（P＜0.05）.TherewasstatisticalsignificanceintheexpressionofMMP9amongdifferenthistologicalsubtypes.The5yeardiseasefreesurvivalrateswere66.7%,50.0%,35.3%,0%inpatientswithgrade0,1,2,3ofMMP9stainingrespectively.The5yeardiseasefreesurvivalrateswere66.7%,44.4%,38.9%,0%inpatientswithgrade0,1,2,3ofIL6stainingrespectively.CONCLUSION:TheexpressionsofMMP9andIL6intumorcellsarehigherthanthoseinreactivehyperplasiaoflymphnodes.Furthermore,haveacorrelationwithhistologicalsubtypes.ThestaininggradesofMMP9andIL6areimportantindexestoestimatetheprognosisofnonHodgkinslymphoma.

　　【Keywords】gelatinaseB;interleukin6;lymphoma,nonHodgkins;Immunohistochemistry

　　【摘要】目的：研究MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤不同组织分型中的表达，探讨染色分级与预后的关系.方法：应用免疫组织化学SP法检测51例非霍奇金淋巴瘤组织中MMP9及IL6的表达；并对患者进行随访7a.结果：经免疫组化SP法检测MMP9及IL6主要表达于肿瘤细胞的胞质中，MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表达均高于对照组（P＜0.05）,MMP9的表达在非霍奇金淋巴瘤组织分型间有意义；MMP9染色分级为0，1，2，3级者5a生存率依次为66.7%，50.0%，35.3%，0%；IL6染色分级为0，1，2，3级者5a生存率依次为66.7%，44.4%，38.9%，0%.结论：MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表达均高于对照组,且与非霍奇金淋巴瘤的组织分型相关，是判断非霍奇金淋巴瘤预后的重要指标.　　【关键词】明胶酶B；白细胞介素6；淋巴瘤，非霍奇金；免疫组织化学

　　细胞外基质和基底膜是肿瘤生长和扩散的基础屏障，而金属蛋白酶及其抑制剂则是细胞外基质代谢的主要调节者.肿瘤的浸润与转移是衡量肿瘤生物学行为的重要指标，也是肿瘤危害的根源所在.大量研究显示，金属蛋白酶主要通过降解细胞外基质、促进新生血管形成及调节细胞黏附3个方面在肿瘤的生物学行为中发挥作用［1-2］.IL6的生物学活性具有比较明显的双重性，即一方面具有重要的生理意义；另一方面则参与多种疾病的病理过程.有报道，宫颈癌和其他的实体瘤中有较高水平的IL6［3］.

　　1材料和方法

　　1.1材料甘肃省肿瘤医院病理科1990/2000年确诊的非霍奇金淋巴瘤患者51（男32，女19）例，年龄9～72（平均56.3）岁；术前未做放化疗；组织标本经甲醛固定，石蜡包埋，HE染色后，按修订的Kiel分类和工作分类标准，借助免疫组化标记确定以下类型：外周T细胞淋巴瘤7例，滤泡型淋巴瘤8例，淋巴母细胞性淋巴瘤4例，弥漫型大B细胞淋巴瘤32例；所有患者均接受了CHOP方案治疗.另选取淋巴结反应性增生12例为对照组，年龄8～68（平均51.7）岁,两组年龄差别无统计学意义（P>0.05）.MMP9mAb，SP试剂盒，APES,DAB显色剂购自福州迈新生物技术有限公司，IL6多克隆抗体为武汉博士德生物工程公司产品.

　　1.2方法免疫组织化学染色按免疫组化SP法常规进行，切片经二甲苯脱蜡，乙醇水化后，微波炉中抗原修复，常规石蜡切片，厚4μm，经HE染色评估后室温自然干燥，用1∶100，IL6及MMP9一抗作用过夜，生物素化二抗孵育，链亲和素生物素过氧化物霉复合物作用后经DAB显色封片观察.每批实验均以福州迈新生物技术有限公司和武汉博士德生物工程公司提供的阳性对照片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照.显微镜下观察MMP9和IL6，以胞质内或胞膜出现棕黄色颗粒为阳性染色.参照Talvensaari等描述的分级方法，显微镜下选取染色理想部位，高倍镜用半定量法评估其染色，每视野选取200个细胞数，根据染色强度及染色细胞百分率分为：阴性：阳性细胞百分率<10%（）,细胞内颗粒着色浅几乎无色；弱阳性：阳性细胞百分率10%～20%（+）,细胞内着色为浅黄色；阳性：阳性细胞百分率20%～49%（），细胞内颗粒着色为桔黄色；强阳性：阳性细胞百分率>50%（），细胞内颗粒着色为棕黄色.为描述方便，将染色阴性（-），弱阳性（+），阳性（），强阳性（）分别用0，1，2，3级表示.

　　统计学处理：所有数据均采用SPSS10.0软件包处理，根据资料的性质，相关性分析采用Spearman等级相关，等级资料组间比较采用秩和检验.预后分析用生存分析的KaplanMeier法和Logrank检验.　　2结果

　　2.1MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表达MMP9和IL6在非霍奇金淋巴瘤组织中均有阳性表达，主要表达于肿瘤细胞胞质或胞膜，在基质细胞和血管内皮细胞亦有阳性染色.MMP9在非霍奇金淋巴瘤中表达的强阳性率（2级和3级）为76.5%，阳性率（1，2，3级）则高达92.2%，且在非霍奇金淋巴瘤中不同分型的表达均明显高于淋巴结反应性增生组（P＜0.05，表1），同时不同组织学分型中的表达存在统计学差异.IL6在非霍奇金淋巴瘤中的强阳性率（2和3级）为70.6%，阳性率（1，2，3级）则高达92.2%，且在非霍奇金淋巴瘤中不同分型的表达均明显高于淋巴结反应性增生组（P<0.05，表1）.本实验中IL6在非霍奇金淋巴瘤不同组织学分型中的表达不存在统计学差异，而IL6在非霍奇金淋巴瘤的表达与MMP9的表达呈正相关（r=0.956）.　　表1MMP9和IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表达　略

　　2.2MMP9及IL6在非霍奇金淋巴瘤中的表达与预后的关系MMP9染色分级为0，1，2，3级者5a生存率依次66.7%，50.0%，35.3%和0%.IL6染色分级为0，1，2，3级者5a生存率依次为66.7%，44.4%，38.9%，0%.用Logrank法和Breslow法的检测结果一致；MMP9和IL6的染色分级与患者生存率之间的差异有统计学意义；同时我们也可直观的看到染色分级低的生存率曲线高于染色分级较高的一组.通过生存率曲线分析，MMP9（图1）和IL6（图2）的染色分级与患者的生存时间有密切关系.