126例急性白血病非常免疫表型分析

当前位置：主页>医学论文>药学论文>文章内容126例急性白血病非常免疫表型分析来源：www.51lw.com作者：[标签:作者]发布时间：2008-05-28
作者：贺景娟,李耀华,孙雪静,万岁桂,徐娟,苏力,田丁

【择要】白血病细胞异常免疫表型是区别于正常造血细胞的重要特性之一，也是流式细胞术检测微小残留病的基础。为了相识急性白血病的异常免疫表型特性，本研究采用四色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门技能对126例急性白血病患者的异常免疫表型举行阐发，并开端探究其在微小残留病检测中的意义。效果表现：约76％的患者可以检测到明确的异常抗原表达，白血病异常免疫表型可分为以下四类：抗原跨系列表达、跨阶段表达、太甚表达及缺失表达，其阳性率分别为39％、46％、21％和29％。约11％的患者仅孕育发生了单一的表型异常，另外祸者则可以检测到两类或更多的表型异常。结论：在大多数急性白血病患者中可以检测到明确的白血病异常免疫表型，在此基础上应用多参数流式细胞仪可以有用检测微小残留病变。

【要害词】急性白血病

AberrantImmunophenotypesin126PatientswithAcuteLeukemia

AbstractTheexistenceofleukemiaaberrantimmunophenotypes（LAIP）hasbeensuggestedtobeavaluabletoolforthedetectionofminimalresidualdisease（MRD）,astheycoulddistinguishleukemiccellsfromnormalhematopoieticprogenitors.ThisstudywaspurposedtoanalyzethecharacteristicsofLAIPinacuteleukemiaandfurtherexploretheproportionofdifferenttypesofLAIPinacuteleukemiapatients.Flowcytometry（FCM）withfourcolorandCD45/SSCgatingwereusedtodetecttheantigenexpressioninsamplesofbonemarrowfrom126patientswithacuteleukemia.TheresultsshowedthatdefiniteLAIPcouldbedetectedinabout76%patients.TheLAIPcouldbedividedintofourgroupsascrosslineageantigenexpression,asynchronousantigenexpression,antigenoverexpressionandantigenlackexpression.ThepercentagesoftheseLAIPswere39%,46%,21%and29%respectively.About11%outofanalyzedcasesshowedtheexistanceofonlyoneaberrantphenotypewhiletwoormoreofaberrantphenotypescouldbedetectedinmajoritycases.ItisconcludedthattheLAIPwithfoursubgroupscanbedetectedinthemajorityofpatientswithacuteleukemiaandimmunophenotypingbasedonLAIPisapplicableforthedetectionofMRD.

Keywordsacuteleukemia;leukemiaaberrantimmunophenotype;minimalresidualdisease

急性白血病是一种克隆性恶性增殖的血液体系疾病，恶性细胞抗原的表达具有很大的异质性。异常表达的抗原不光在初发的白血病细胞中可以检测到，而且在治疗后到达形态学完全缓解（CR）时，渣滓的白血病细胞仍生存其初发时的抗原异常表达［1］。白血病细胞的克隆性增殖特性为临床白血病免疫分型诊断及微小残留病（MRD）检测提供了更正确依据。

白血病细胞上异常表达的抗原称为白血病异常免疫表型（leukemiaaberrantimmunophenotyping,LAIP）,LAIP是白血病细胞与正常造血细胞相区另外重要特性之一，也是流式细胞术（flowcytometry,FCM）免疫分型诊断及MRD检测的基础。综合文献报道［2-6］，LAIP重要包括以下4种范例：抗原跨系列表达、跨阶段表达、太甚表达及缺失表达。本研究采用四色流式细胞术及CD45/SSC双参数散点图设门的要领对126例急性白血病患者举行了全面的异常免疫表型阐发，以期对急性白血病的临床诊断及MRD的检测提供资助。

126例急性白血病患者源头于宣武医院血液科1999年11月-2006年06月时期的门诊或住院病人，其中男性71例，女性55例，中位年岁46（14-89）岁。全部患者都经骨髓形态学、细胞化学及流式细胞术免疫分型诊断。FCM分型中髓系、淋系列抗原确定尺度参照EGIL评分［7］,形态学诊断及分型尺度参见《白血病的诊断及疗效尺度》［8］。FAB亚型诊断效果：M1/M278例，M4/M517例，M6/M75例，BALL17例以及TALL9例。由于多数急性早幼粒细胞白血病（APL，AMLM3）异常免疫表型不显着［9］，因此未将M3纳入研究领域。

单克隆抗体初恐慌性白血病患者FCM免疫分型检测所需抗体基本资料见表1。流式细胞仪FACSCalibur型（BectonDickinson公司产品），功率为15MW，激光光源采用氩离子气体激光器，波长为488nm，举行PE、FITC、PerCP等荧光素的检测，另配有小功率半导体激光器，波长为635nm，举行APC的检测。团结两个物理参数，前向散射光（forwardscatter，FSC）及侧向散射光（sidescatter,SSC），可举行4色6参数的综合阐发。

标本处理、单克隆抗体标志骨髓液直接免疫荧光标志法。征求初恐慌性白血病患者的骨髓液3-5ml，肝素抗凝，用PBS，pH值7.2-7.4稀释后调治细胞浓度至（2-5）×107/ml，室温下举行单克隆抗体标志，详见荧光抗体标志说明书。每次检测种种荧光素均设定相应抗体的同型阴性比力。

初发患者免疫分型抗体组合免疫分型抗体组合见表2。实验各管均加入CD45PerCP以举行CD45/SSC双参数散点图设门。

上机检测每次细胞获取前先用FACScomp自动软件阐发尺度荧光微球（calibrationbeads）以校准仪器。样本网络及效果阐发均采用CellQuest（version3.2）软件举行。由于白血病样本通常存在异常的散射光特性及较强的自觉荧光，部分患者样本在数据获取前须举行条件设置优化：作FSC/SSC二维散点图，调治FSC增益及SSC检测电压，使差异细胞群既能全部表如今散点图内，又可清楚区分，同时调治FSC阈值去除大部分碎片。初诊患者每管网络10000个细胞。全部检测均采用CD45/SSC双参数散点图框定白血病细胞的位置（设门），再对门内细胞举行种种荧光抗体的阐发。设门内细胞大于相应阴性比力20％确定为抗原阳性表达。

采用Epidata7.0软件两次输入数据并校准，应用STATA7.0软件包举行统计学阐发，本研究中数据假设检验均采用双侧检验，以p<0.05作为显着性检验的尺度。