【摘要】光学成像技术与基因标记技术结合的非侵入性在体分子荧光成像可以实时监测肿瘤的发生发展过程
【关键词】绿色荧光蛋白（GFP）；肿瘤；光学成像 ThestudyoforiginalmetastasismodelaboutACC-Mtumorinnudemice
XIONGTao.
CollegeofBiologyandTechnology，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430070，China.CollegeofLifeScience，YangtzeUniversity，Jingzhou，Hubei434025，China
【Abstract】Invivonon-intrusivemolecularfluorescenceimagingthatwascombinedopticalimagingwithgenetaggingtechniquemaysimultaneouslydetectgrowthandmetastasisoftumor.Humanadenoidcysticcarcinomacell（ACC-M）wastransfectedwithpEGFP-C1，andthetumormodelaboutoriginalmetastasisbysubmandibularglandinjectionofACC-M-GFPwasestablished.Tumor-bearingmicewereviewedwithwhole-bodyfluorescentimagingsystem.Theresultsshowedthatmetastasisoftumorwerevisualizedclearlywiththissystem.Thisstudyprovidesaplatformformonitoringtumormetastasisandevaluatinginvivoefficacyofantitumordrugs.
【Keywords】greenfluorescentprotein;tumor;opticalimaging
荧光基因标记技术和光子学技术的迅速发展，使得光学成像技术可以实现肿瘤病理生理动力学过程的在体研究，其中涉及基因表达、血管生成、细胞黏附与迁移，组织间隙和淋巴中的物质传输、代谢微环境与药物传送等［1，2］，因此，开展光学成像研究意义重 为了能够为肿瘤治疗药物的筛选搭建一个很好的平台。本研究利用GFP转染人涎腺癌细胞ACC-M，建立了GFP标记肿瘤的原位转移模型，并对模型动物进行了整体荧光成像初步研究。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试剂和仪器人涎腺癌细胞系ACC-M由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供，DMEM（Gibco，USA）、新生小牛血清（杭州四季青公司）、pEGFP-C1（Clontech，USA）、FuGENE6（Roche，Switzerland）、G418（Promega，USA）。
1.1.2实验动物BALB/cnu/nu裸鼠由湖北省防疫站实验动物中心提供，鼠龄为4～5周，体重15～20g，在本实验室无特定病原体（specific-pathogenfree，SPF）的裸鼠间饲养。动物饲养和实验严格按照中华人民共和国《实验动物管理条例》要求进行。
1.2方法
1.2.1细胞培养用含10%小牛血清、青霉素100mg/ml和链霉素100mg/ml的DMEM培养基作为ACC-M细胞的培养液，于5%CO2饱和湿度，37℃细胞培养箱内常规培养。
1.2.2细胞转染和筛选采用FuGENE6脂质体转染ACC-M细胞。选取其中GFP表达量最高的单克隆细胞株作为实验细胞株，并命名为ACC-M-GFP。
1.2.3肿瘤种植和尾静脉注射0.25%的胰酶消化处于对
1.2.4整体光学成像实验所用整体光学成像系统为自制［8］。成像
2.1ACC-M-GFP肿瘤的原位肺转移的光学成像通过整体荧光成像我们可以从裸鼠外部直接看见表达GFP的肿瘤从颌下腺转移到裸鼠的肺。如图1所示，外部荧光成像可以在肿瘤种植到颌下腺后86天直接看见肺部有荧光肿瘤（图1A），通过解剖在图1B中发现肺部确实有肿瘤。
2.2ACC-M-GFP肿瘤的其他转移的光学成像同样采用整体荧光成像我们可以从裸鼠外部直接看见表达GFP的肿瘤从颌下腺转移到裸鼠的骨骼和膀胱。在图2中，我们可以看见在肿瘤种植到颌下腺后102天直接看见骨骼和膀胱处有荧光肿瘤。
3讨论 本研究采用人涎腺癌细胞ACC-M为实验对象，获得了稳定高表达GFP的单克隆细胞ACC-M-EGFP。我们在以前的实验中比较了ACC-M和ACC-M-EGFP这两种细胞的生长曲线，发现转染后细胞生长特性基本一致，说明GFP表达对细胞生长并无明显影响。因此，ACC-M-EGFP可以代替ACC-M进行活体肿瘤的生长和转移研究。因此，该原位转移模型可成为抗肿瘤转移药物快速筛选的理想模型。
（本文图片见封三）（略）
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（编辑：悦铭）
作者单位：430074湖北武汉，华中科技大学生命科学与技术学院
434025湖北荆州，长江大学生命科学学院
