人涎腺癌原位转移裸鼠模型的建立

人涎腺癌原位转移裸鼠模型的建立推荐到首页　□　《中华医学研究杂志》2006年第07期1/3页123

【关键词】绿色荧光蛋白（gfp）；肿瘤；光学成像

【摘要】光学成像技术与基因标记技术结合的非侵入性在体分子荧光成像可以实时监测肿瘤的发生发展过程。本研究利用绿色荧光蛋白（gfp）转染人涎腺癌细胞acc-m，建立了gfp标记肿瘤原位转移模型，并对模型进行了整体荧光成像的初步研究。实验结果表明光学成像可以从时间和空间上反映肿瘤转移的过程，因而这种模型同在体光学成像的结合为研究肿瘤治疗药物的筛选提供了一种很好的平台。

　　【关键词】绿色荧光蛋白（gfp）；肿瘤；光学成像　　thestudyoforiginalmetastasismodelaboutacc-mtumorinnudemice

　　xiongtao.

　　collegeofbiologyandtechnology，huazhonguniversityofscienceandtechnology，wuhan430070，china.collegeoflifescience，yangtzeuniversity，jingzhou，hubei434025，china

　　【abstract】invivonon-intrusivemolecularfluorescenceimagingthatwascombinedopticalimagingwithgenetaggingtechniquemaysimultaneouslydetectgrowthandmetastasisoftumor.humanadenoidcysticcarcinomacell（acc-m）wastransfectedwithpegfp-c1，andthetumormodelaboutoriginalmetastasisbysubmandibularglandinjectionofacc-m-gfpwasestablished.tumor-bearingmicewereviewedwithwhole-bodyfluorescentimagingsystem.theresultsshowedthatmetastasisoftumorwerevisualizedclearlywiththissystem.thisstudyprovidesaplatformformonitoringtumormetastasisandevaluatinginvivoefficacyofantitumordrugs.

　　【keywords】greenfluorescentprotein;tumor;opticalimaging

　　荧光基因标记技术和光子学技术的迅速发展，使得光学成像技术可以实现肿瘤病理生理动力学过程的在体研究，其中涉及基因表达、血管生成、细胞黏附与迁移，组织间隙和淋巴中的物质传输、代谢微环境与药物传送等［1，2］，因此，开展光学成像研究意义重大，也非常适时。特别是自从绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，gfp）的出现，光学成像广泛应用于生物医学的各个领域［3］。基于gfp的在体荧光成像可揭示肿瘤发生发展的细胞和分子机制，非侵入性在体评价抗肿瘤药物疗效［4］。早期gfp标记肿瘤研究采用终点分析［5，6］（end-pointassay）方法检测肿瘤转移灶，但该方法不能实时记录肿瘤转移过程。yang［7］等首先利用整体光学成像系统对表达gfp的肿瘤实时非侵入荧光成像，记录了肿瘤转移过程。在体光学成像作为一种非侵入的外部成像技术，对于软组织和骨转移癌检测具有非常灵敏和快速的特点［7］。　　为了能够为肿瘤治疗药物的筛选搭建一个很好的平台。本研究利用gfp转染人涎腺癌细胞acc-m，建立了gfp标记肿瘤的原位转移模型，并对模型动物进行了整体荧光成像初步研究。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　1.1.1试剂和仪器人涎腺癌细胞系acc-m由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供，dmem（gibco，usa）、新生小牛血清（杭州四季青公司）、pegfp-c1（clontech，usa）、fugene6（roche，switzerland）、g418（promega，usa）。

　　1.1.2实验动物balb/cnu/nu裸鼠由湖北省防疫站实验动物中心提供，鼠龄为4～5周，体重15～20g，在本实验室无特定病原体（specific-pathogenfree，spf）的裸鼠间饲养。动物饲养和实验严格按照中华人民共和国《实验动物管理条例》要求进行。

　　1.2方法

　　1.2.1细胞培养用含10%小牛血清、青霉素100mg/ml和链霉素100mg/ml的dmem培养基作为acc-m细胞的培养液，于5%co2饱和湿度，37℃细胞培养箱内常规培养。

　　1.2.2细胞转染和筛选采用fugene6脂质体转染acc-m细胞。选取其中gfp表达量最高的单克隆细胞株作为实验细胞株，并命名为acc-m-gfp。

　　1.2.3肿瘤种植和尾静脉注射0.25%的胰酶消化处于对数生长期的acc-m-gfp细胞，冰冷的无菌磷酸盐缓冲液（pbs）洗涤3次，最后制成1×106个/ml单细胞悬液。对5只裸鼠的颌下腺进行原位注射0.2ml的acc-m-gfp细胞液建立原位肺转移模型。

　　1.2.4整体光学成像实验所用整体光学成像系统为自制［8］。成像前，裸鼠轻度麻醉，调整成像系统进行整体荧光成像。

　　2.1acc-m-gfp肿瘤的原位肺转移的光学成像通过整体荧光成像我们可以从裸鼠外部直接看见表达gfp的肿瘤从颌下腺转移到裸鼠的肺。如图1所示，外部荧光成像可以在肿瘤种植到颌下腺后86天直接看见肺部有荧光肿瘤（图1a），通过解剖在图1b中发现肺部确实有肿瘤。

　　2.2acc-m-gfp肿瘤的其他转移的光学成像同样采用整体荧光成像我们可以从裸鼠外部直接看见表达gfp的肿瘤从颌下腺转移到裸鼠的骨骼和膀胱。在图2中，我们可以看见在肿瘤种植到颌下腺后102天直接看见骨骼和膀胱处有荧光肿瘤。