阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子水平与免疫防卫能力的研究
免疫学杂志2000年第5期第16卷基础免疫学
作者：魏泉德 朱家勇
单位：魏泉德（广东医学院寄生虫学教研室，广东湛江524023）；朱家勇（广东医学院寄生虫学教研室，广东湛江524023）
关键词：细胞因子；阿米巴肝脓肿；细胞免疫；弓形虫
［摘要］目的了解阿米巴肝脓肿患者机体的免疫防卫能力
［中图分类号］R382.1［文献标识码］A
［文章编号］1000-8861（2000）05-0349-03
Studyonlevelofcytokinesinseraandimmunedefenseabilityofpatientswithamoebicliverabscess
WEIQuan-de，ZHUJia-yong
（DepartmentofParasitology，GuangdongMedicalCollege，Zhanjiang524023，China）
［Abstract］ObjectiveToinvestigatetheimmunedefenseabilityofpatientswithamoebicliverabscess．MethodsELISA、colorimetryandflowcytometrywereusedtodetectTNF-α，IL-6，IL-8，sIL-2R，toxoplasmainfectionrate（ToR），NOandCD4／CD8T-cellin40patientswithamoebicliverabscess．Theredcellfunctionwasmeasuredatthemeantimebydetec-tingRBC-C3bRRandRBC-ICRinmembraneofredcell．ResultsThelevelofTNF-α，IL-6，IL-8，sIL-2R，NOandRBC-ICRinpatientswashigherthanthosefoundinthecontrolgroup．RBC-C3bRRwaslowerthanthatinthecontrolgroup．ThenumberofCD4T-cellingroupofpatientsdecreased，whilethatofCD8T-cellincreased．NosignificantdifferenceexistedbetweenToRfoundinpatientsandcontrolgroup．ConclusionThenon-specificcell-mediatedimmunitywassuppressedinpatientswithamoebicliverabscesswhilespecificcell-mediatedimmunityenhanced．Theimmunedefenseabilityofthepatientswasnormal．
［Keywords］cytokine；amoebicliverabscess；cell-mediatedimmunity；toxoplasma
阿米巴肝脓肿是由溶组织内阿米巴感染所引起的临床常见病，溶组织内阿米巴可分泌毒素、酶、吞噬宿主免疫细胞，从而抑制宿主免疫应答。主要免疫学特征［1］。为了解阿米巴肝脓肿患者机体的细胞因子水平和综合免疫能力，我们检测了40例阿米巴肝脓肿患者血清中TNFα、IL-6、IL-8、sIL-2R、NO水平，RBC免疫功能及CD4／CD8比例，弓形虫感染率并探讨其意义。
1 材料和方法
1.1 样本采集 40例阿米巴肝脓肿患者，均为我附属医院传染科病人，年龄20～59岁。治疗
1.2 血清TNFα、IL-6、IL-8和sIL-2R测定 双抗夹心ELISA：sIL-2R试剂盒由白求恩医科
1.3 RBC免疫功能测定 致敏／未致敏酵母菌由第二军医大学长海医院免疫室提供。RBC的C3b受体花环率（RBC-C3bRR）及RBC免疫复合物花环率（RBC-ICR）的测定参照文献［2］。
1.4 外周血CD4／CD8测定 采用美国Coulter公司EPICS-XL型流式细胞仪测定，CD4／CD8双标单抗及样品处理液均为Coulter公司产品，正常值CD4约为53％，CD8约为25％，按说明书操作。
1.5 血清中一氧化氮（NO）测定 比色法试剂盒由军事医学科学院提供，按说明书操作。用VIS-723型分光光度计（上海第三分析仪器厂产品），545nm比色，读OD值。用亚硝酸钠为标准品，绘制标准曲线，根据样品OD值，按标准曲线计算NO含量。
1.6 血清中弓形虫抗体IgG测定 直接ELISA试剂盒由卫生部兰州生物制品研究所提供。血清1∶50稀释，100μl／well加入已包被弓形虫抗原的酶标软板，每份血清加2孔，37°C15min；加酶标抗体（工作液）37°C15min；底物显色。ELISA检测仪（华东电子管厂产品，DG3022）于410nm测OD值并打印结果。
1.7 统计分析 样本均值的比较用t检验；率的比较用χ2检验；相关系r检验。
2 结果
2.1 血清细胞因子水平 阿米巴肝脓肿患者血清TNFα、IL-6、IL-8和sIL-2R水平均极显著地高于正常对照组（P＜0.01），见表1。
2.2 NO测定结果 阿米巴肝脓肿患者血清NO含量平均为59．43±2．91μmol／L，显著高于正常对照组（50.04±6．23μmol／L），P＜0.05，见表1。
2.3 红细胞免疫功能 阿米巴肝脓肿患者的RBC-C3bRR明显低于对照组；而RBC-ICR则明显高于对照组（P＜0.01）。血清sIL-2R水平与RBC-C3bRR负相关（r＝－0.95，P＜0.05）；与RBC-ICR正相关（r＝0.98，P＜0.05），见表2。
2.4 T细胞亚群测定结果 阿米巴肝脓肿患者外周血的CD4均值为25.76％±5．72％，明显低于标准对照值（53％）；而CD8均值为34．92％±6．29％，明显高于标准对照值（25％）；CD4／CD8比值（0.74±0.30）低于标准对照值（2.12，P＜0.01），见表2。
2.5 弓形虫感染率 阿米巴肝脓肿患者血清弓形虫阳性率为12．5％，与正常组阳性率（10％）无差异，见表2。
表1 40例阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子及一氧化氮水平（ Tab1 Levelofcytokinesandnitricoxidein40patientswithamoebicliverabscess（groupnsIL-2R（U／ml）TNFα（ng／ml）IL-6（ng／ml）IL-8（ng／ml）NO（μmol／L）patients40614．17±352．86**0.874±0.452**0.198±0.021**0.648±0.075**59．43±2．91*control40109．62±79．290.118±0.0510.061±0.0070.057±0.00450.04±6．23 *P＜0.05，**P＜0.01表2 40例阿米巴肝脓肿患者RBC免疫功能、T细胞亚群、弓形虫感染率（ToR）
Tab 2 Red-cell immune function，CD4／CD8
T-cell and infection rate of toxoplasma（ToR）in patients with
amoebic liver abscessgroupnRBC-C3bRR（％）RBC-ICR（％）CD4（％）CD8（％）CD4／CD8ToR（％）patients4010.15±2．48**14．45±3．15**25．76±5．72**34．92±6．29**0.74±0.30**12．5control4017．45±3．508．15±2．6453252．1210.0**P＜0.013 讨论
IL-2R是制剂，在阿米巴肝脓肿患者主要由阿米巴感染后激活B细胞而表达，除表达于细胞膜之外，亦可呈游离状态即可溶性IL-2R（sIL-2R），本研究表明：阿米巴肝脓肿患者血清sIL-2R异常增高，因其可竞争结合IL-2而导致机体细胞免疫功能受到抑制［1］
已证实红细胞免疫功能主要有：增强吞噬细胞吞噬功能；识别和递呈抗原；清除循环免疫复合物；效应细胞等作用，属非特异性细胞免疫范畴。红细胞免疫的生理学基础是细胞免疫粘附作用。评价红细胞免疫功能是以红细胞免疫粘附受体的活性
阿米巴引起T细胞的免疫反应较复杂。CAMPBELL等［3］用沙鼠作动物模型，发现阿米巴引起的T细胞应答涉及Th0、Th1及Th2型T细胞（Th1细胞主要分泌IL-2、TNF-α、IFN-；而Th2则产生IL-4、IL-6、IL-9、IL-10）。感染早期（5～10d）［4］。本研究表明阿米巴肝脓肿患者血清TNFα、IL-6和IL-8均增高，表明阿米巴肝脓肿患者有特异性细胞免疫功能增强。本实验中的病例病程均在2～4周，且未经抗阿米巴治疗，由于临床上病程的确切时间较难确定，故可能与动物实验结果不一致。一氧化氮（NO）是宿主抗溶组织内阿米巴感染的重要防御性介质，由NO介导的杀灭效应在阿米巴肝脓肿病程中发挥着重要作用。已证实细胞因子特别是TNF-α可刺激巨噬细胞及其它免疫效应细胞产生ΝΟ［5，6］，可杀灭组织内62％～73％的阿米巴［7］。阿米巴肝脓肿患者NO水平高于正常，也说明宿主特异性细胞免疫功能得到增强。
CD4主要分布于Ti／Th细胞，CD8则分布于Ts／Tc细胞。CD4下降、CD8增高，CD4／CD8下降，说明机体细胞免疫功能受抑制。但在阿米巴肝脓肿患者，因其主要为非特异性细胞免疫受抑制，特异性细胞免疫增强，所以免疫防卫能力正常。而CAMPBELL等［3］证实阿米巴感染早期虽然抑制T细胞、巨噬细胞活性，但感染动物可抵抗再感染。推测阿米巴肝脓肿患者外周血CD4下降主要为Th（活化的Th表达IL-2R），CD8增高主要为Tc。
弓形虫是一种机会致病性球虫，在机体免疫功能下降时，感染率随之上升。因此可用弓形虫感染率来判断机体免疫功能是否正常。本实验表明：阿米巴肝脓肿病人弓形虫感染率与正常无差异，说明阿米巴肝脓肿病人机体免疫防卫能力正常。
综上所述，阿米巴肝脓肿病人免疫功能受抑制主要为非特异性细胞免疫，特异性细胞免疫增强，其免疫防卫能力正常。
［作者简介］魏泉德（1963－），男，湖北当阳市人，讲师，硕士，主要从事寄生虫免疫及分子疫苗的研究。
［参考文献］
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［收稿日期］2000-01-11；［修回日期］2000-04-22
