【摘要】目的观察Caveolin1在骨肉瘤中的分布和表达情况，分析Caveolin1在骨肉瘤临床诊断、治疗及预后评价中的意义。方法采用免疫组织化学SP法检测39例骨肉瘤组和22例良性骨肿瘤中Caveolin1的表达，镜下观察Caveolin1在肿瘤组织中的分布，应用自动图像分析检测Caveolin1的表达情况。结果Caveolin1表达于所有标本的肿瘤微血管和小血管内皮上，Caveolin1表达于大多数骨肉瘤的肿瘤细胞，定位于细胞膜和胞浆，但在良性骨肿瘤中表达很微弱。Caveolin1阳性表达率在骨肉瘤组中为59.0％，在良性骨肿瘤中为18.2％，两组间具有显著性差异（P＜0.01），有统计学意义，表明Caveolin1在骨肉瘤中高表达。Caveolin1的表达与骨肉瘤肿瘤体积、病理分型和患者的性别无关（P＞0.05），与骨肉瘤的组织分化和是否转移有关（P＜0.05）。结论Caveolin1在骨肉瘤中高表达原因不明，其可能是促进骨肉瘤发生发展的一个潜在因素，也可能作为骨肉瘤治疗的新靶点。
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【关键词】Caveolin1；骨肉瘤；免疫组织化学
TheExpressionandClinicalSignificanceofCaveolin1inOsteosarcoma
GUOGuiming，LVZhi，LIUYanbin
（DepartmentofOrthopaedics，theSecondAffiliatedHospitalofShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China）
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheexpressionofCaveolin1inosteosarcomaandanalyseitssignificanceindiagnosis，treatmentandprognosisofosteosarcoma.MethodsCaveolin1wasdetectedbySPimmunohistochemicalmethodin39casesofosteosarcomaand22casesofbenignbonetumor，thedistributionofCaveolin1intumortissueswasobservedunderopticalmicroscope，andtheexpressionlevelofCaveolin1wasdetectedbyautoimageanalysis.ResultsCaveolin1wasstronglyexpressedintheendotheliumofmicrovesselsandsmallvesselsinallcases，andmainlylocalizedinthecellmembranesandcytoplasmofthemostosteosarcomatoustumorcells，Caveolin1wasexpressedweaklyinbenignbonetumor.ThepositiverateofCaveolin1inosteosarcomagroups（59.0％）wassignificantlyhigherthanthatinbenignbonetumor（18.2％）（P＜0.05）.TheexpressionofCaveolin1wascorrelatedwiththemetastasisofosteosarcomaandtumortissuedifferentiation，butnotassociatedwiththepatients′gender，tumor′sizeandthepathologicaltype.ConclusionThereasonwhythemostosteosarcomatoustumorcellsstronglyexpressedCaveolin1wasunknown；Caveolin1isapotentialfactorduringosteosarcomagrowthandinvasion；Caveolin1maybeanewtargetforosteosarcomatoustherapy.
Keywords：Caveolin1；osteosarcoma；immunohistochemistry
骨肉瘤是常见的源于间叶组织的恶性肿瘤，以能产生骨样组织的梭形细胞为特征，占原发骨肿瘤的10％，占原发骨恶性肿瘤的20％，75％的病人年龄在10～30岁，是严重影响青壮年身心健康的恶性疾病［1］。Caveolin1是Caveolae的重要结构蛋白，参与了Caveolae的形成，以及细胞增殖、分化、凋亡和血管生成信号通路的调控，与肿瘤的发生、发展和转移有密切关系，目前认为Caveolin1同时具有肿瘤抑制因子和促进肿瘤侵袭转移的双重作用。笔者尚未见国内外有关Caveolin1在骨肿瘤中的研究报道，本研究应用超敏免疫组化SP法，检测骨肉瘤和对照组中Caveolin1的分布和表达情况，旨在分析Caveolin1对骨肉瘤的临床诊断、治疗及预后的意义。
1材料与方法
1.1研究对象和试验分组试验组：选取山西医科大学第二医院骨科和病理科2003年6月至2007年3月的骨肉瘤石蜡包埋标本39例；对照组：选取近四年骨软骨瘤石蜡包埋标本11例和骨纤维结构不良石蜡包埋标本11例。所有标本均4μm厚连续切片，分别进行HE染色和免疫组化染色。由两位有经验的病理医师再次阅片，复核病理诊断。
1.2实验试剂兔抗Caveolin1多克隆抗体（sc894），购自SantaCruzBiotechnology公司；超敏SP（兔）免疫组化试剂盒（KIT9706），酶底物显色剂（DAB0031），均购自福州迈新生物有限公司。其余由病理科提供。
1.3实验方法采用免疫组织化学SP法检测Caveolin1在骨肉瘤和骨软骨瘤、骨纤维结构不良中的表达，整个操作按照超敏SP（兔）试剂盒所附说明书进行。所有标本以PBS替代一抗作为阴性对照，以已知Caveolin1强烈表达的肾脏穿刺组织作为阳性对照。
1.4结果判定为反映标本高倍视野下Caveolin1染色总程度，利用ImageProPlus6.0行自动图像分析，选择平均光密度（meandenesity，MD）为指标。MD只作定性分析，以MD＞0.0177为表达阳性，MD≤0.0177为表达阴性。1.5统计学处理采用SPSS11.5统计软件，计数资料用χ2检验或Fisher精确概率检验法进行统计学处理，结果均以P＜0.05为差异显著性检验水平。
2结果
2.1Caveolin1在标本中的表达和分布免疫组化染色显示：a）Caveolin1表达于所有标本的肿瘤微血管和小血管内皮上；b）Caveolin1表达于大多数骨肉瘤的肿瘤细胞，免疫产物呈棕黄色，定位于细胞膜和胞浆，阳性细胞在肿瘤组织中呈散在分布，无一定规律；c）Caveolin1在良性骨肿瘤中无表达或表达很微弱（见图1～2）。
2.2Caveolin1在骨肉瘤和良性骨肿瘤中的表达Caveolin1在骨肉瘤和良性骨肿瘤中的阴性表达见表1。22例良性骨肿瘤中，Caveolin1阳性表达率为18.2％；39例骨肉瘤中，Caveolin1阳性表达率为59.0％，两组间具有显著性差异（P＜0.01）。
2.3Caveolin1与骨肉瘤患者各项临床病理指标的关系（见表2）表1Caveolin1在骨肉瘤和良性骨肿瘤中的表达由表2可见，Caveolin1的表达与骨肉瘤患者的性别、肿瘤体积和病理分型无关（P＞0.05）。在39例骨肉瘤病例中，高分化为12例，Caveolin1阳性表达4例，阳性表达率为33.3％；而中和低分化为27例，Caveolin1阳性表达19例，阳性表达率为70.4％。经统计学分析，两者之间Caveolin1的表达有统计学差异（P＜0.05）。肿瘤转移组Caveolin1阳性表达率为91.7％，肿瘤无转移组表达率为44.4％，两者之间的差异具有统计学意义（P＜0.05）。
3讨论
Caveolin1于1992年由Rothberg等［2］首先发现，分子质量为21～24KDa，修饰于Caveolae的内表面，基因定位于人类染色体7q31.1，有三个外显子，在大多数细胞中表达。Lofthouse等［3］发现，格根包尔氏细胞中也有Caveolin1的表达。众多研究表明Caveolin1是一种直接参与细胞生长和增殖的负调控基因。Caveolin1在正常组织中高表达，而乳腺癌、肺癌、宫颈癌和结肠癌中Caveolin1表达明显下降，甲状腺滤泡状癌中甚至无Caveolin1表达。Kai［4］应用原位杂交方法检测癌组织和正常组织的cDNA后显示，卵巢癌标本中的Caveolin1表达下调，同时检测了卵巢癌OVXAR3细胞中Caveolin1的表达，体外实验表明Caveolin1抑制了细胞的存活，所以暗示Caveolin1很可能在人卵巢癌上皮中是一种抑制基因。Franco等［5］证实，Caveolin1的缺失能导致表表2Caveolin1与骨肉瘤各项临床病理指标的关系皮细胞的过度增殖，进而加速皮肤癌的发生。Engelman等［6］研究认为，Caveolin1就是7号染色体D75S22基因座上的肿瘤抑制基因。
与上述报道相悖，少数研究发现某些肿瘤组织中Caveolin1呈高表达。Yang等［7］研究了大鼠原发性前列腺癌及转移性前列腺癌的多个癌细胞株，发现在大鼠正常前列腺上皮细胞中Caveolin1表达微弱；在原发性前列腺癌细胞中其表达加强，呈胞浆弥漫性；而在转移性前列腺癌细胞中其表达更强，呈浓集颗粒
