关键词:老年病房；质粒暴发；铜绿假单胞菌
摘要 目的：同期监测老年病房住院患者的医院感染情况，及时切断医院感染的传播途径，预防医院感染的质粒暴发。方法：对老年病房住院患者进行咽拭子培养，菌体药物敏感实验，质粒提取，质粒消除实验。结果：在监测对象中发现，存有完全相同的耐药谱及质粒谱的不同铜绿假单胞菌株6株。结论：结果表明在一定条件下有医院感染的发生及质粒暴发的可能。
中国图书资料分类法分类号 R378.991
1998年11月～1999年1月，我地区发生由流感病毒甲Ⅳ引起的大面积流感，持续时间长，老年病房暴满。为此，我们对老年病房的住院患者进行了医院感染的同期监测，分析同一菌种的耐药谱及质粒谱。结果发现，有同源性铜绿假单胞菌（PseudomonasAeruginosaPA）感染聚集性发生，提示临床暴发感染的可能性，建议合理使用抗生素，减少其对细菌产生耐药性的压力。
1 对象与方法
1.1 对象与方法 来源于1998年11月～1999年1月住院的呼吸道感染患者，共61例。
1.2 菌株鉴定及药物敏感实验 取清晨咽拭子做普通细菌培养，经常规方法鉴定菌种，将已确定为PA的菌株按美国NCCLS制定标准，于M-H平板上做羧苄青霉素等8种抗生素的敏感实验。
1.3 质粒提取 将6株有同样耐药谱的PA用碱裂解法［1］提取质粒DNA，水饱和酚、酚／氯仿分别纯化质粒，以丁醇提取浓缩法浓缩质粒DNA至500μg／ml，以5v／cm2h条件上样电泳。
1.4 质粒消除 将含有质粒的PA用0.025%SDS和43℃高温的双重处理进行质粒消除实验。
2 结 果
2.1 全部咽拭子培养出致病菌25株，其中铜绿假单胞菌11株，占44%；葡萄球菌7株，占28%；肺炎克雷伯杆菌5株，占20%；大肠埃希氏菌2例，占8%。PA感染为聚集性发生，除菌株2、6、11号为散在感染外，其余8株均聚集在1998年12月中下旬的十几天内发生。
2.2 将11株PA做抗生素敏感实验，其中6株有同样的耐药谱，并为多重耐药（见表1）。
11株PA100%对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅴ、卡那霉素耐药；100%对氟哌酸敏感。
表1 11株PA抗生素敏感实验结果
1234567891011羧苄青霉素 RSRRSRRSRRS氨苄青霉素 RRRRRRRRRRR先锋霉素Ⅴ RRRRRRRRRRR庆大霉素 RSRRRRRSRRS卡那霉素 RRRRRRRRRRR氯霉素 RRRRSSRRRRS丁胺卡那霉素RSRRRRRSRRR氟哌酸 SSSSSSSSSSSR为耐药 S为敏感
2.3 经0.8%琼脂糖凝胶电泳（0.5V／cm），紫外灯下观察结果，可见一条27kb质粒带（见图1）。证明，有同样耐药谱的6株PA存有一致的质粒外型。
图1 0.8%晾脂糖凝胶电泳27kb质粒带
2.4 将仅对氟哌酸敏感的6株PA，质粒消除实验后做羧苄青霉素等8种抗生素敏感实验，耐药性全部消失。
3 讨 论
3.1 老年患者PA感染发生的易感因素 监测对象平均年龄71.2岁；91.2%的患者有多次住院史；67.8%的患者患两种以上的慢性复合疾病；100%的患者使用过多种抗生素，此次住院期间使用抗生素者为65.24%，仅1例患者是根据药敏结果选用的抗生素，其余患者在用药前均未做细菌培养。
患者高龄、机体抗病能力下降、病因复杂，是其主要易感因素；另外，住院次数多和住院时间长易发生交叉感染，菌株也易产生耐药性，使医院感染机会增多；抗生素的广泛使用，增加了其对细菌的压力，从而导致耐药菌株的繁殖。
3.2 PA菌体繁殖优势态 PA作为条件致病菌，是目前公认医院感染的主要病原菌之一，具有很强的代表性。它侵入无正常防御能力的机体，参与混合感染。其生长条件要求不高，并存有多种耐药株，分别携带可传递和不可传递的多种质粒，不仅诱导对传统抗生素（如卡那霉素、链霉素、四环素等）的耐药性，还可诱导对许多新抗生素如第三代头孢等，甚至对较新的喹喏酮类的耐药性［2、3］。质粒消除实验结果表明了PA质粒与耐药性的关系，医院内暴发感染的追踪，认为多耐药质粒在不同菌种、菌株间的传播是其主要原因［4］。为此很多情况下，细菌的敏感株可变为耐药株。
3.3 合理使用抗生素，减少医院感染 实验结果表明，在监测对象中，有PA感染聚集性发生，并有质粒暴发的可能。并且被检测的11株PA100%耐药于氨苄青霉素、先锋霉素Ⅴ和卡那霉素；100%敏感于氟哌酸。为此，提示临床交替使用抗生素，在治疗过程中要经常做到同期监测，注意新耐药菌可能引起的继发感染。使病房中使用抗生素患者的数量降低到最低水平，使用抗生素的时间控制在最短时间内，尽可能降低抗生素的压力，减少细菌耐药性的产生是十分必要的。同时，在医护人员和患者之间加强医院感染知识的教育和普及，提高医院内各方面人员对医院感染的认识，尽可能适应控制和降低医院感染率的要求。
参考文献
1 金冬雁,黎孟枫译.分子克隆实验指南.?科学出版社,1996.16～24
2 MurrayBE.细菌耐药的新动态和导致的治疗难题.国外医学微生物学分册,1992,15（4）:170
3 JoyceAK,MoreavTV,ManchJNetal.铜绿假单胞菌的抗菌剂疗法.药学进展,1993,17（1）:41
4 贾赤宇,陈壁,苏映军.对20株铜绿假单胞菌多重耐药性基因定位的初步研究.中华整形烧伤外科杂志,1995,11（5）:327
1999-04-07收稿 1999-07-28修回
