前言目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建乙型肝炎病毒X蛋白（HBX）反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBX反式激活相关基因。方法以HBX表达质粒pcDNA3。1（-）-X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3。1（-）转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制聚合酶链反应（PCR）,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HBX反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到85个白色克降,进行菌落PCR分析,均得到200～1000bp插入片段。挑取含有插入片段的65个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得19种已知基因序列,和15个未知基因。结论应用SSH技术成功构建了HBX反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明HBX反式调节的靶基因及致肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据。
ObjectivesToconstructasuhtractivecDNAlibraryofgenestransactivatedbyhepatitisBvirusXprotein（HBX）usingsuppressionsubtractivehybridization（SSH）techniqueandtoclonegenesassociatedwithHEXtransactivalingfunction.MethodsThemRNAwasisolatedfromHepG2cellstransfectedwithpcDNA3.1（-）-XandpcDNA3.l（-）emptyvectorrespectively,thencDNAwassynthesized.AfterrestrictionenzymeRsaldigestion,anumberofsmallsizecDNAwasobtained.ThentestercDNAwassubdividedintotwopor...
