0.1μmol/L地塞米松、50μmmol/L维生素C,10μmmol/Lβ甘油磷酸钠、IGF1（Chemikon）,胰岛素和100mL/L胎牛血清.同时，设立正常对照组，只加入含100mL/L胎牛血清的培养基，其余均不加.分别诱导7，14和21d.取出盖玻片，PBS冲洗，40g/L多聚甲醛固定15min.然后应用抗Ⅰ型胶原mAb（Sigma）和ABC法（ABC试剂盒购于北京中杉公司）进行Ⅰ型胶原免疫组织化学染色.加入诱导液组，以PBS和正常鼠血清分别替代一抗作为阴性对照；应用组织化学钙钴法显示碱性磷酸酶（AKP），以不加底物β甘油磷酸钠的孵育液作为阴性对照.
1.2.3Brdu标记MSCs消化P3细胞，以0.5×108个/L将MSCs接种于12孔培养皿，在将要加入Brdu的培养皿中预先放入无菌盖玻片.当细胞铺满皿底40%时加入Brdu（Sigma）溶液，使其终浓度分别为5，10和15μmol/L.孵育12，24，48，72和96h后取出盖玻片，用PBS冲洗，40g/L多聚甲醛固定15min，应用抗BrdumAb（Sigma）和ABC法进行免疫组织化学染色显示Brdu，除在正常血清封闭前以2mol/L盐酸变性30min外，其余均按试剂盒说明书进行操作.以PBS和正常鼠血清分别替代一抗作为阴性对照.另外，将用10μmol/LBrdu标记的MSCs进行传代培养，观察细胞传代后的标记效果.
