p16蛋白在睑板腺癌中的表达及相关性首席医学网2008年11月22日12:30:46Saturday中华临床医师杂志征稿内科临床新进展研讨班重症与血流动力学大会血液净化技术学习班医学类核心期刊征稿第六届世界中医药大会2009世界高血压大会第四届中国国际白血病急危重病护理交流会IOF亚洲骨质疏松班2009年中国药学大会医学影像学术交流会结直肠肛门外科会议口腔正畸学术会议征稿广东研究生学术论坛
作者：胡军，李贵刚，张虹作者单位：（430030）中国湖北省武汉市，华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科
加入收藏夹【摘要】 目的：探讨p16在睑板腺癌（meibomianglandcarcinoma,MGCA）中的表达及其生物学意义。 方法：采用免疫组织化学方法（SP法）,检测p16蛋白在65例石蜡包埋的睑板腺癌标本中的表达,并在不同分化程度及生物学行为的睑板腺癌之间进行比较。 结果：睑板腺癌组织与癌旁组织中p16蛋白表达差异有显著性意义（P<0.05）；睑板腺癌中,p16蛋白表达阳性率随组织学分级降低而降低,不同分化组中p16蛋白表达差异有显著性意义（P<0.01）。不同生物学行为睑板腺癌中p16蛋白表达差异显著，无复发组p16蛋白表达率显著高于复发转移组（P<0.01）。 结论：睑板腺癌中p16蛋白表达异常提示其在睑板腺癌发生发展中起着重要作用。p16蛋白的表达缺失或失活是睑板腺癌发生的重要分子事件，并与睑板腺癌的分化程度、浸润能力及复发转移密切相关，可以为临床判断预后提供依据。
【关键词】睑板腺癌;p16;肿瘤分化
0引言 睑板腺癌（meibomianglandcarcinoma，MGCA）在国外文献上报道不多，属于恶性程度很高的恶性肿瘤,在国人眼睑恶性肿瘤中,其发病率仅次于基底细胞癌,位居眼睑恶性肿瘤的第2位（约占32.7%）[1]。研究表明,p16/cyclinD1/Rb途径的异常代表着肿瘤发生的一条共同途径，我们采用免疫组化方法对65例睑板腺癌标本中p16蛋白表达进行检测,并复习其病历资料，探讨p16蛋白在睑板腺癌中的表达及与睑板腺癌组织分化及复发转移之间的相互关系。
1材料和方法
1.1材料收集华中科技大学同济医学院病理学系及附属同济医院病理科1988/2007年经病理证实的睑板腺癌标本65例。患者年龄最小51～86（平均64.6）岁，男27例,女38例，47例发生于上睑，18例发生于下睑，发生复发及颈部淋巴节转移者14例。标本经甲醛固定,常规石蜡包埋。睑板腺癌患者术前均未经化疗或放疗，并取30例癌旁正常组织作为对照。兔抗人p16多克隆抗体均为SantaCruz公司产品；SP试剂盒为美国Zymed公司产品,均购自北京中山生物技术有限公司。
1.2方法除常规病理检查，细针抽吸细胞学检查（FNAC）可见多泡样背景下孤立散在的细胞群，细胞呈环状分布[2]。依据spencer分级标准[3]，本组高分化型24例，中度分化型34例，低分化型7例。将睑板腺癌组织石蜡包埋块作4μm厚连续切片,1张用于选取癌旁正常组织和常规苏木精伊红染色,另3张用于免疫组化染色（SP法）,加入一抗前将切片放入pH6.0，0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液内,于微波炉中高温（95℃，10min）,进行抗原修复,然后取出,室温下冷却20min,以下步骤按SP试剂盒提供的常规步骤进行DAB显色。阳性对照片由北京中山生物技术公司提供,用与一抗同种动物同稀释度的正常血清及PBS分别代替一抗作空白对照。 统计学处理:运用SPSS13.0forwindows软件对数据进行统计分析。
2.1结果判定标准p16蛋白多定位于核内,部分可见于胞质内（图1）。以细胞核内出现棕黄色颗粒者为阳性,当细胞质有表达时,其胞核表达的强度必须超过胞质的表达,方可确定为阳性细胞。应用HMIS2000高清晰度彩色医学图像分析系统，光镜下每张切片随机选取10个高倍视野，阳性细胞数≤10%定为（）;10%<阳性细胞数≤30%为（+）;30%<阳性细胞数<50%为（++）;阳性细胞数≥50%为（+++）。
2.2p16蛋白的表达29例癌旁正常组织表达p16蛋白，均定位于核内。65例睑板腺癌中，53例表达p16蛋白,经统计分析,正常癌旁组织与睑板腺癌组织p16蛋白表达强度差异有显著性意义（P<0.05,表1）。
2.3p16蛋白表达与睑板腺癌复发转移的关系无复发组p16蛋白阳性表达率明显高于复发转移组且差异有显著性意义（P<0.01,表2）。
2.4p16蛋白表达与睑板腺癌组织学分型的关系（表3）本组睑板腺癌中ｐ16蛋白表达阳性率随组织学分级降低而下降，且差异有显著性意义（P<0.01）。
3讨论 细胞周期是细胞生命活动的基本过程，若细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态。哺乳动物细胞增殖周期的G1晚期有一称为“检查点”（checkpoint）的控制点,细胞必须通过这一“检查点”才能实现G1S转换并进入G2M期完成增殖。研究发现,细胞周期G1期的调节因子与癌变关系最为密切，通过使Rb磷酸化或去磷酸化构成以Rb为中心的一个复杂网络。G1“检查点”的调节因子主要涉及p16蛋白、Rb蛋白及CyclinD1,这些调节因子的表达失衡可导致肿瘤的发生[47]。 本实验结果表明:p16在睑板腺癌组织中的表达阳性率低于正常癌旁组织,提示睑板腺癌发生的分子机制涉及p16的表达缺失或失活。65例睑板腺癌组织中,82%（53/65）的病例p16蛋白表达阳性,19%（12/65）病例p16蛋白表达阴性，与癌旁正常组织p16蛋白表达差异显著（P<0.05）。本研究中，p16蛋白表达阳性率在无复发组（51例）及复发转移组（14例）分别为94%和及29%，差异有显著性意义（P<0.01），提示p16可能是判断睑板腺癌生物学行为的重要指标，睑板腺癌发生中p16缺失或失表达可使肿瘤细胞获得更大的生长趋势[8,9]，由此推测p16蛋白表达降低预示肿瘤浸润能力的获得。 本研究同时表明，睑板腺癌组织学遵循p16弱表达的规律,提示p16在细胞周期中异常表达并通过反馈通路的调节作用诱导睑板腺癌的发生。p16蛋白表达阳性率随组织学分级降低而下降,且表达差异十分显著（P<0.01）。p16蛋白缺失者多集中在低分化组中，提示p16表达缺失或失活与睑板腺癌分化不良有关,p16蛋白表达率的降低是睑板腺癌组织分化不良的信号，也提示了睑板腺癌的不良预后。
图1p16蛋白在睑板腺癌中的表达瘤细胞核及胞浆呈棕黄色（sp法，×200）（略）
表1睑板腺癌、正常癌旁组织中ｐ16蛋白的表达（略）
表2睑板腺癌p16蛋白表达与肿瘤复发转移间的关系（略）
表3睑板腺癌p16蛋白表达与其组织学分型的关系（略）
总之，p16蛋白的表达缺失或失活是睑板腺癌发生的重要分子事件，并与睑板腺癌的分化程度、浸润能力及复发转移密切相关，可以为临床判断预后提供依据。
【参考文献】 1孙为荣.眼科病理学.北京:人民卫生出版社1996:589593 2GarbyalRS,GuptaP,KumarM,etal.Acytologicperspectiveonmeibomianglandcarcinoma.ActaCytol2007;51（2）:171177 3SpencerWH,FontRL,GreenWR.OphthalmicPathology.3nded.1986;3:22012214 4MassagueJ.G1cellcyclecontrolandcancer.Nature2004;432（7015）:298306 5MiyazakiH,ShiozakiA,NiisatoN,etal.ChlorideionscontroltheG1/Scellcyclecheckpointbyregulatingtheexpressionofp21throughap53independentpathwayinhumangastriccancercells.BiochemBioResCommun2008;8:366（2）:506512 6BartekJ,BartkovaJ,LukasJ.Theretinoblastomaproteinpathwayincellcyclecontrolandcancer.ExpCellRes1997;25:237（1）:16 7CaldonCE,DalyRJ,SutherlandRL,etal.Cellcyclecontrolinbreastcancercells.JCellBiochem2006;97（2）:261274 8TsubariM,TiihonenE,LaihoM.Cloningandcharacterizationofp10,analternativelysplicedformofp15cyclindependentkinaseinhibitor.CancerRes1997;57（14）:29662973 9deCastroIP,BenetM,JimenezM,etal.Mousep10,analternativesplicedformofp15INK4b,inhibitscellcycleprogressionandmalignanttransformation.CancerRes2005;65（8）:32493256
请您在下面输入常用的Email地址、职业以便我们定期通过邮箱发送给您最新的相关医学信息，感谢您浏览首席医学网！
邮箱：职业：
