【摘要】 为了研究Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的变化，探讨Graves病伴血细胞减少症的发病机制，以流式细胞术测定24例患者外周血Th细胞亚群及CD5+B淋巴细胞的数量、B淋巴细胞胞浆内凋亡蛋白Bcl2的表达水平，并与18名正常人做对照。结果表明：正常对照组Th1细胞和Th2细胞百分率、Th2/Th1比值、CD5+B细胞百分率、Bcl2表达率分别是（0.医学论文网39±0.24）%、（0.28±0.15）%、（0.52±0.12）%、（7.89±0.38）%、（36.49±6.79）%；患者组Th1细胞和Th2细胞百分率、Th2/Th1比值、CD5+B细胞百分率、Bcl2表达率分别是（0.81±0.45）%、（6.83±3.02）%、（20.55±6.15）%、（20.89±1.62）%、（80.25±15.56）%，均显著多于正常人对照（P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05）。结论：Graves病伴血细胞减少症发病可能与Th1/Th2比例失衡，Th2细胞增加，导致CD5+B细胞数量上升及凋亡减低，本身抗体的产生增加有关。
【关键词】Graves病;血细胞减少;淋巴细胞;免疫;细胞凋亡
LymphocyteChangesinPatientswithGraves'sDiseaseAccompaniedbyHematocytopenia医学论文网
AbstractTheaimofstudywastoinvestigatethelymphocytechangesinperipheralbloodofpatientswithGraves'sdiseaseaccompaniedbyhematocytopeniaandtoexploreitspathogenesis.ThequantityandratioofTh2、Th1、CD5+B、Bcl2levelin24Graves'sdiseasepatientswithhematocytopeniaweredetectedbyFACS,and18adultswereselectedasnormalcontrols.TheresultsindicaledthatthepercentagesofTh1,Th2,ratioofTh2/Th1,CD5+B,Bcl2leveinperipheralbloodofthepatientswere（0.81±0.45）%,（6.83±3.02）%,（20.55±6.15）%,（20.89±1.62）%,（80.25±15.56）%,respectively,andwerehigherthanthoseofnormalcontrols［（0.39±0.24）%（P<0.05）,（0.28±0.15）%（P<0.01）,（0.52±0.12）%（P<0.01）,（7.89±0.38）%（P<0.05）,（36.49±6.79）%（P<0.05）］.ItisconcludedthatthepathogenesisofGraves'sdiseasewithhematocytopeniamayberelatedtounbalanceofTh1/Th2,increaseofTh2inducingoverexpressionofCD5+BandBcl2onBcell.
KeywordsGraves'sdisease;hematocytopenia;lymphocyte;immune;apoptosis医学论文网
Graves病由Parry于1825年初次演讲，是甲状腺功能亢进症的最常见病因，主要表现为甲状腺毒症、弥漫性甲状腺肿、眼征和胫前黏液水肿。目前公认Graves病的发生与本身免疫有关，属于本身特异性本身免疫病，即抗体介导的免疫反应性疾病，临床上经常与血细胞减少症并存，说明两者之间可能具有同样的发病机制，或就是一种疾病的不同阶段的不同组织受累的表现。为探讨其发病机制，我们检测24例Graves病伴血细胞减少症患者的外周血淋巴细胞的变化，并与18名正常人进行了对照，兹演讲如下。
材料和方法
病例
24例Graves病患者，均为2004年8月至2005年12月在我院门诊及住院的患者，男5例，女19例，年龄16-56岁，平均年龄38.5岁。24例患者均同时符合以下标准：①高代谢症状和体征；②弥漫性甲状腺肿大伴或不伴血管杂音；③血清FT4增高，TSH减低。初诊时血常规检测中仅伴血小板减少者10例，其Plt值（10-78）×109/L；血小板及白细胞均减少9例，其Plt值（30-60）×109/L，WBC值（1.23-3.78）×109/L；全血细胞减少5例，WBC值（2.3-2.58）×109/L，Hb值（70-85）g/L,Plt值（57-70）×109/L。18名正常对照者中，男5例，女13例，年龄18-58岁，平均年龄40.1岁。
试剂
所用鼠抗人CD4、IFNγ、IL4、CD5、Bcl2单克隆抗体和鼠抗人CD19单抗克隆抗体均购自美国Ancell生物制剂公司，牛血纯洁蛋白和RPMI1640购自深圳晶美公司，聚甲基丙烯酸、依若霉素、莫能霉素及皂素购于美国Sigma公司。流式细胞仪为BeckmanCoulter公司产品。医学论文网
外周血单个核细胞分离
采集患者及正常对照者的外周血4ml,以5íTA抗凝，800r/min离心10分钟，去上清，加入细胞培养液RPMI1640至4ml，混匀，用PBS等量稀释后分装于2个离心管中，用Ficoll淋巴细胞分离液（密度1.077）分离单个核细胞。
细胞培养及细胞因子分泌抑制
细胞按5×105/ml的浓度培养，并加入PMA和依若霉素以扩大原有细胞因子的产量，用莫能霉素抑制高尔基体对细胞因子的转运。基本培养基为IMDM，体系如下：10%胎牛血清、2mmol/L谷氨酰胺、50μg/ml青霉素、50μg/ml链霉素、50ng/mlPMA、250ng/ml依若霉素、140ng/ml莫能霉素。细胞与培养液混合后加入到24孔板中，在37℃、95%湿度、5%CO2培养箱内培养5小时。医学论文网
荧光染色
用结合异硫氢酸荧光素（FITC）的鼠抗人CD4单克隆抗体间接标记细胞膜CD4，用结合藻红蛋白荧光素的鼠抗人IFNγ、IL4单克隆抗体间接标记细胞浆内的IFNγ、IL4，Th1细胞为CD4+、IFNγ+，Th2细胞为CD4+、IL4+。医学论文网
CD19+CD5+细胞测定医学论文网
试管中加入鼠抗人CD19FITC和鼠抗人CD5PE各20μl,再加入单个核细胞悬液100μl，混匀，4℃避光孵医学论文网育40分钟，PBS液洗2遍，加入10g/L的多聚甲醛固定液200μl，混匀，4℃固定30分钟。对照管中加入鼠抗人CD19FITC和鼠抗人IgG1PE各20μl，按上述方法操做。最后用流式细胞术测定CD19+CD5+细胞，计算CD19+CD5+/CD19+的表达率。医学论文网
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B淋巴细胞胞浆内Bcl2表达测定
加入鼠抗人CD19FITC20μl,单个核细胞悬液100μl，4℃避光孵育30分钟，用PBS液洗2遍，加入1%的多聚甲醛固定液1ml，混匀，在4℃条件固定15分钟，各加入含1g/L皂素的PBS1ml，室温孵育60分钟，用PBS液洗2遍。在试验管中加入鼠抗人Bcl2PE单克隆抗体各20μl。对照管中加入同型不相关鼠抗人IgG1PE单克隆抗体各20μl，4℃避光孵育40分钟，用PBS液洗3遍，然后加入1%的多聚甲醛固定液200μl，混匀，4℃固定30分钟。流式细胞术测定CD19+细胞胞浆内Bcl2表达率。用流式细胞仪（FACSVantageBectonDickinson公司产品）进行细胞测定，用cellQuest3.1获取和分析细胞。共2页:上一页12顶一下（0）0%踩一下（0）0%------分隔线----------------------------上一篇：试析民国时期岭南医学文献的特点-www.yixuelw.cn下一篇：
